登革病毒基因组逆转录及其cDNA扩增的研究

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hzbhwh
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我们建立了一种简便、特异、敏感的登革病毒RNA逆转录及用Taq DNA聚合酶对其cDNA进行扩增的方法。采用的两个引物分别与登革病毒NS1基因的意义股和反意股互补,它们首尾之间的距离约为539核苷酸。与两引物相对应的NS1基因的序列在4个血清型的登革病毒中具有很高的保守性。

被感染的C6/36细胞培养上清中的登革2型病毒与其特异抗体结合,经含Triton X-100的裂解缓冲液处理,释放出病毒RNA。病毒与其特异抗体的结合,病毒RNA的释放,及其cDNA的合成与扩增均在同一管中进行。扩增产物经1.5%琼脂糖胶电泳可清晰地看到一单一的约539bp的带条。该方法不仅简化了常规PCR法中样品制备的步骤,而且也提高了它的特异性。利用这种方法可检出2—2.5TCID50登革病毒的RNA。

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