【摘 要】
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以牦牛为试验对象,旨在克隆牦牛增强子结合蛋白α基因(CEBPα),预测其蛋白结构和功能,同时分离得到牦牛脂肪细胞,并检测CEBPα在牦牛不同组织中的表达及牦牛脂肪细胞诱导分化过程中的表达.采集成年牦牛(4岁)的心、肝、脾、肾、胃、小肠、皮下脂肪、内脏脂肪和肌肉组织,利用PCR技术获得CEBPα基因序列,得到其CDS序列;生物信息学的方法预测该基因的序列同源性及蛋白结构;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CEBPα在牦牛不同组织的表达;通过胶原酶消化法,分离得到牦牛前体脂肪细胞;qRT-PCR检测
【机 构】
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西南民族大学,青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室,四川 成都 610041;西南民族大学 畜牧兽医学院,四川 成都610041;青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室,四川 成都
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以牦牛为试验对象,旨在克隆牦牛增强子结合蛋白α基因(CEBPα),预测其蛋白结构和功能,同时分离得到牦牛脂肪细胞,并检测CEBPα在牦牛不同组织中的表达及牦牛脂肪细胞诱导分化过程中的表达.采集成年牦牛(4岁)的心、肝、脾、肾、胃、小肠、皮下脂肪、内脏脂肪和肌肉组织,利用PCR技术获得CEBPα基因序列,得到其CDS序列;生物信息学的方法预测该基因的序列同源性及蛋白结构;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CEBPα在牦牛不同组织的表达;通过胶原酶消化法,分离得到牦牛前体脂肪细胞;qRT-PCR检测CEBPα在诱导分化0,3,6,9 d的表达模式.结果表明,牦牛CEBPα基因的CDS序列长度为645 bp,编码214个氨基酸;牦牛CEBPα基因与普通牛的同源性相对较高,核酸同源性为99.73％,氨基酸同源性为99.19％;构建系统进化树的结果显示,牦牛与普通牛和绵羊的相似性较高;CEBPα蛋白为具有跨膜结构、发生磷酸化/去磷酸化的不稳定亲水性蛋白,蛋白质的二级结构以α螺旋(27.10％)和无规则卷曲(67.29％)为主;qRT-PCR结果显示,CEBPα基因在牦牛皮下脂肪组织中表达最高,在肾、脾和内脏脂肪组织中低表达;CEBPα 在牦牛脂肪细胞诱导分化过程中表达量逐渐升高.本试验克隆获得了CEBPα的CDS区序列,确定了其在牦牛各个组织中的表达量并明确了该基因在牦牛脂肪细胞诱导分化过程中的表达模式,为揭示CEBPα基因在牦牛脂肪组织和脂肪细胞中的功能提供基础数据.
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