高活性β-内酰胺酶的分离、表达和性质

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应用DNA家族改组方法制备TEM型β-内酰胺酶基因突变文库,利用平皿初筛和琼脂稀释法复筛获得一株酶活力增高的突变体blaTEM^m。带有该突变基因的大肠杆菌,其最低抑菌浓度(MIC)比带有野生型blaTEM的大肠杆菌高24倍(氨苄青霉素)、4-8倍(头孢唑啉)、4-8倍(头孢呋辛)、16-32倍(头孢他啶)、8倍以上(头孢曲松)和4~8倍(头孢噻肟)。在E.coli BL21(DE3)高效表达blaTEM和blaTEM^m,利用离子交换柱层析和凝胶过滤层析对包涵体进行柱上复性和纯化,获得纯度达90%的重组
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