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90年代末期,全自动血培养仪逐渐被应用于临床,细菌培养由原来复杂繁锁的手工操作转变为现在的全自动化,克服了人工培养周期长,阳性率低的缺点。近年,菌血症/败血症在医院感染中的发生率呈不断上升趋势,采用全自动血培养仪90%以上的阳性结果都能在48 小时内得到仪器提示,因此自动化血培养仪已成为一种准确可靠的诊断菌/败血症的手段。本文就我院检验科微生物室使用法国梅里埃Bact/ Alert3D120全自动血培养仪过程中出现假阳性,假阴性以及培养出的病原菌构成做一分析。
1方法
1.1标本采集:成人采静脉血10 ml、儿童采静脉血5ml,无菌接种,3小时内放入BacT / Alert120 全自动血培养系统中检测。
1.2系统报警处理:将系统阴性报警时限设定为5天。阳性报警标本,用无菌注射器抽取瓶中培养液转种血平板和EMB平板,放于35℃普通培养箱中培养,同时涂片革兰染色,若初次转种无细菌生长,则连续3 d 培养均为阴性,并且涂片革兰染色未发现致病菌时定为假阳性报警。
1.3细菌鉴定:检出的病原菌用VITEK JRSYST EMS 系统进行鉴定。
2结果
2.1阳性菌株和报警时间:758例标本, 阳性报警128例,其中116例培养出病原菌, 阳性率15. 3% ;假阳性12例,假阳性率1.56%。阳性报警最短时间为大肠埃希菌,平均3.5h;阳性报警最长时间为李斯特菌,平均65.4h。
2.2病原菌分布:培养鉴定出116例阳性病原菌见表1
3讨论
梅里埃Bact/ Alert3D120全自动血培养系统利用微生物生长代谢过程中产生CO2 ,导致瓶中pH 降低,而血培养瓶底部有CO2 感受薄膜,使感受薄膜上的指示剂由蓝变黄, 将信号传入检测系统, 当超过阈值后报警来判断有無微生物生长[1],该系统能模拟细菌的生长曲线, 在细菌的对数生长期发出阳性报警。系统每10 min 检测1 次, 24h连续监测, 阳性结果随时报警, 系统阳性结果高于手工法的阳性结果。根据阳性报警和涂片镜检结果及时向临床初步报告结果, 提高了对患者的有效治疗, 节约了时间, 具有传统手工方法不可比拟的优势。
不同种类细菌的阳性报警时间可能与血液中最初的细菌量、抗生素抑制等其他因素有关,本文利用Bact/ Alert3D120对临床最常分离的致病菌,肠杆菌科阳性报警时间整体上短于其他菌种阳性报警时间, 与文献报道[2]一致。本文12份假阳性经转种培养,无细菌生长革兰染色镜检未找到细菌,瓶底感受薄膜也没有变色, 其原因可能是细胞呼吸代谢产生的CO2 起始值高, 对培养基的pH 改变不大,也有可能是体细胞(如肿瘤标本)过度代谢产生CO2而导致假阳性。因此, 对于假阳性结果在进行必要的2 次转种时, 应结合临床病例分析, 控制实验条件,以便更好地对血培养阳性报警结果进行分析和掌握。
有文献[3]报道有假阴性结果产生,其可能原因是真菌或非发酵菌感染。由于其生长慢, 代谢慢, CO2 产量,导致假阴性结果,另就是儿童标本量不足,也可能导致假阴性。但本文未见假阴性出现。
参考文献
[1] TC Thorpe, ML Wilson, JE Turner, JL DiGuiseppi,et al. BacT/Alert: an automated colorimetric microbial detection system [J] . J Cl M icrobiol, 1990,28( 7) : 1808.
[2] 张秀珍,胡云建,宣天芝,等。两种全自动血液培养系统临床标本平行检测对比评价[J]. 中华医学检验杂志, 2001,24 ( 4):302.
[3] 刘宏,李成荣,陈宏础。全自动血培养仪的质量控制[J]。重庆医科大学学报,2002,27( 2):166-167。
1方法
1.1标本采集:成人采静脉血10 ml、儿童采静脉血5ml,无菌接种,3小时内放入BacT / Alert120 全自动血培养系统中检测。
1.2系统报警处理:将系统阴性报警时限设定为5天。阳性报警标本,用无菌注射器抽取瓶中培养液转种血平板和EMB平板,放于35℃普通培养箱中培养,同时涂片革兰染色,若初次转种无细菌生长,则连续3 d 培养均为阴性,并且涂片革兰染色未发现致病菌时定为假阳性报警。
1.3细菌鉴定:检出的病原菌用VITEK JRSYST EMS 系统进行鉴定。
2结果
2.1阳性菌株和报警时间:758例标本, 阳性报警128例,其中116例培养出病原菌, 阳性率15. 3% ;假阳性12例,假阳性率1.56%。阳性报警最短时间为大肠埃希菌,平均3.5h;阳性报警最长时间为李斯特菌,平均65.4h。
2.2病原菌分布:培养鉴定出116例阳性病原菌见表1
3讨论
梅里埃Bact/ Alert3D120全自动血培养系统利用微生物生长代谢过程中产生CO2 ,导致瓶中pH 降低,而血培养瓶底部有CO2 感受薄膜,使感受薄膜上的指示剂由蓝变黄, 将信号传入检测系统, 当超过阈值后报警来判断有無微生物生长[1],该系统能模拟细菌的生长曲线, 在细菌的对数生长期发出阳性报警。系统每10 min 检测1 次, 24h连续监测, 阳性结果随时报警, 系统阳性结果高于手工法的阳性结果。根据阳性报警和涂片镜检结果及时向临床初步报告结果, 提高了对患者的有效治疗, 节约了时间, 具有传统手工方法不可比拟的优势。
不同种类细菌的阳性报警时间可能与血液中最初的细菌量、抗生素抑制等其他因素有关,本文利用Bact/ Alert3D120对临床最常分离的致病菌,肠杆菌科阳性报警时间整体上短于其他菌种阳性报警时间, 与文献报道[2]一致。本文12份假阳性经转种培养,无细菌生长革兰染色镜检未找到细菌,瓶底感受薄膜也没有变色, 其原因可能是细胞呼吸代谢产生的CO2 起始值高, 对培养基的pH 改变不大,也有可能是体细胞(如肿瘤标本)过度代谢产生CO2而导致假阳性。因此, 对于假阳性结果在进行必要的2 次转种时, 应结合临床病例分析, 控制实验条件,以便更好地对血培养阳性报警结果进行分析和掌握。
有文献[3]报道有假阴性结果产生,其可能原因是真菌或非发酵菌感染。由于其生长慢, 代谢慢, CO2 产量,导致假阴性结果,另就是儿童标本量不足,也可能导致假阴性。但本文未见假阴性出现。
参考文献
[1] TC Thorpe, ML Wilson, JE Turner, JL DiGuiseppi,et al. BacT/Alert: an automated colorimetric microbial detection system [J] . J Cl M icrobiol, 1990,28( 7) : 1808.
[2] 张秀珍,胡云建,宣天芝,等。两种全自动血液培养系统临床标本平行检测对比评价[J]. 中华医学检验杂志, 2001,24 ( 4):302.
[3] 刘宏,李成荣,陈宏础。全自动血培养仪的质量控制[J]。重庆医科大学学报,2002,27( 2):166-167。