解淀粉芽孢杆菌SYBCH47铁载体合成酶基因dhbA、B、C的克隆表达与序列分析

来源 :基因组学与应用生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yyeeq507
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铁载体是微生物在缺铁环境中产生的小分子螯合物,利用CAS双平板法鉴定出已有菌株产铁载体,经鉴定所产铁载体为儿茶酚型。以解淀粉芽孢杆菌SYBC H47基因组DNA序列为模板,通过PCR克隆得到了铁载体产生途径中前体物质2,3-二羟基苯甲酸(DHB)合成所需酶的三个基因dhb A、B、C,结果表明三基因全长分别为786bp,927bp,1197bp,诱导表达,经SDS-PAGE电泳表明三蛋白大小分别为27.1,34.3,42.9 k Da。用KMB培养基诱导表达三株重组菌株,表明三重组菌株铁载体产量均有明显提高。经同源性比对和生物信息学分析发现,Dhb A、B、C三基因分别编码2,3-二氢-2,3-二羟基苯甲酸脱氢酶、异分支酸酶、异分支酸合酶,dhb A、C蛋白结构稳定,而dhb B蛋白结构则不是很稳定,其二级结构主要由α螺旋,β折叠,延伸链及无规卷曲构成但比例各不相同。以上结果为铁载体合成的研究提供了理论依据。
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