【摘 要】
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目的 观察印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)信号通路对大鼠前软骨干细胞(PSCs)分化和增殖的调控作用.方法 应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs.噻唑蓝(MTT)比色
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院肿瘤科
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目的 观察印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)信号通路对大鼠前软骨干细胞(PSCs)分化和增殖的调控作用.方法 应用免疫磁珠筛选技术获得大鼠PSCs.噻唑蓝(MTT)比色法筛选Ihh信号阻断剂环王巴明(Cyclopamine,Cyclo)的最低有效浓度,PTHrP真核质粒(pEGPF-N1-PTHrP)转染PSCs.细胞分4组:对照组(Control,PBS 100μl,n=3)、Ihh信号阻断组(Ihh-,20nmol/L Cyclo 100μl,n=3)、PTHrP信号增强组(PTHrP+,1.0μg pEGPF-N1-PTHrP,n=3)和双重干预组(Ihh-/PTHrP+,20nmol/L Cyclo 100μl+1.0μg pEGPF-N1-PTHrP,n=3).干预2周后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ihh、PTHrP、Ⅱ型胶原(ColⅡ)的mRNA表达,BrdU掺入法测细胞增殖,免疫组织化学检测ColⅡ表达,阿辛蓝染色检测酸性糖胺多糖含量.结果 成功获得PSCs,筛选获得Cyclo最低有效工作浓度为20nmol/L;1.0μg PTHrP真核质粒转染效率>60%,转染后高表达该基因;Ihh-组ColⅡ基因和蛋白表达明显下降,PTHrP+组和Ihh-/PTHrP+组ColⅡ基因和蛋白表达稳定,酸性糖胺多糖分泌多;BrdU实验显示Ihh-组和Ihh-/PTHrP+组增殖率分别为(23.26±3.96)%和(21.65±5.12)%,相对Control组(35.42±3.79)%差异有统计学意义(P0.05).结论 Ihh-PTHrP信号通路参与对PSCs分化和增殖的调控,Ihh信号可独立调控PSCs的增殖,但对其分化的调控依赖PTHrP信号的作用.
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