【摘 要】
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以建立的苜蓿高频再生体系为基础,利用GUS染色组织分析法,研究了影响根癌农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensConn)LBA4404菌株介导的苜蓿(MedicagosativaL.)遗传转化的若干因素
【机 构】
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山东省林业科学研究院,山东省林业科学研究院,山东农业大学园艺学院,山东省林业科学研究院,山东省林业科学研究院,甘肃农业大学草业学院,中国科学院遗传研究所,中国科学院遗传研究所 济南250014,济南2
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以建立的苜蓿高频再生体系为基础,利用GUS染色组织分析法,研究了影响根癌农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensConn)LBA4404菌株介导的苜蓿(MedicagosativaL.)遗传转化的若干因素,建立了苜蓿快速有效的遗传转化体系,获得了转BADH基因植株。苜蓿的不同基因型、附加乙酰丁香酮的浓度、预培养与否、菌液浓度、共培养时间和卡那霉素浓度等对转化频率都有一定影响。最高转化频率可达43.3%,抗性植株经PCR和PCR-Southernblot检测表明,目的基因已整合进苜蓿基因组中。
Based on the established high-frequency regeneration system of alfalfa, several factors influencing the genetic transformation of Medicago sativa L. mediated by Agrobacterium tumefaciens Conn LBA4404 strain were studied by using GUS staining and tissue analysis, and the rapid and effective Genetic transformation system, obtained transgenic BADH gene plants. The different genotypes of alfalfa, the concentration of acetosyringone addition, pre-culture or not, bacterial concentration, co-culture time and kanamycin concentration all had certain influence on transformation frequency. The highest transformation frequency was 43.3%. The PCR and Southern blot results showed that the target gene was integrated into the genome of alfalfa.
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