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目的
对RA成纤维样滑膜细胞（FLS）体外分离培养方法进行优化，观察Dishevelled 2 （Dvl 2）在RA-FLS中对血管内皮生长因子（VEGF）分泌的影响。
方法将行膝关节置换的RA患者滑膜剪碎，利用优化的组织块法进行RA-FLS体外分离培养。构建Dvl 2慢病毒过表达质粒，转染后利用Q-PCR及ELISA检测VEGF mRNA及蛋白表达情况。然后再将转染后RA-FLS予TNF-α重组蛋白10 ng/ml刺激24 h，再次检测VEGF mRNA及蛋白表达情况。采用两独立样本t检验进行统计分析。
结果成功将RA-FLS分离并进行体外培养。当感染复数为30并配合使用适当浓度的polybrene促进转染即可满足实验要求，Dvl 2的mRNA较空病毒对照组升高79倍。与空病毒对照组相比，Dvl 2对RA-FLS分泌VEGF有轻度抑制作用；TNF-α刺激后，Dvl 2达表达组VEGF的mRNA[（2.15±0.10）倍，（2.92±0.47）倍，t=-3.924，P= 0.003]及蛋白[（285±100）pg/ml，（155±61）pg/ml，t=-2.714，P=0.022]均低于空病毒对照组。
结论Dvl 2可抑制TNF-α对RA-FLS分泌VEGF的促进作用，具体机制有待进一步研究。