【摘 要】
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目的 建立尖锐湿疣(CA)患者血清和宫颈分泌物人乳头瘤病毒(HPV)6b型E7特异性抗体检测方法.方法 利用PCR扩增HPV 6b E7全长基因,构建重组原核表达质粒pET32a(+)/HPV 6b E7,原
【机 构】
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温州医学院微生物学与免疫学教研室/分子病毒与免疫研究所,温州医学院附属第二医院妇产科
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目的 建立尖锐湿疣(CA)患者血清和宫颈分泌物人乳头瘤病毒(HPV)6b型E7特异性抗体检测方法.方法 利用PCR扩增HPV 6b E7全长基因,构建重组原核表达质粒pET32a(+)/HPV 6b E7,原核表达产物采用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.进一步经镍螯合亲和层析法(Ni-NTA Agarose)纯化后作为包被抗原,以间接ELISA方法分别对56例CA患者、81名健康对照者的血清和宫颈分泌物标本中的特异性抗体进行检测,另取43例宫颈癌患者的血清标本作为对照;同时用PCR方法对56例CA组织标本进行HPV6bDNA的检测.结果 从CA组织标本中扩增的HPV 6b E7全长基因与标准序列(GenBank登录号:NC001355)同源性为99.5%.HPV 6b E7融合蛋白在原核表达系统中得到了较高效的表达(40μg/ml).经间接ELISA检测,CA组血清特异性IgG抗体水平明显高于宫颈癌组和健康对照组(P＜0.05),吸光度(A)均值分别为1.82±0.48、1.36±0.39和1.39±0.27.CA组宫颈分泌物特异性sIgA抗体水平亦显著高于健康对照组(P＜0.05),A值分别为0.63±0.26和0.53±0.06.经PCR检测,CA患者组织HPV 6b E7DNA阳性率为78.6%(44/56).与PCR检测结果比较,HPV6bE7特异性IgG和sIgA抗体用于检测CA患者HPV 6b感染的敏感性分别为68.2%(30/44)、54.6%(24/44),特异性均为100%(12/12).结论 CA患者血清和宫颈分泌物HPV 6b E7特异性抗体,用于诊断HPV 6b感染具有一定的敏感性和较高的特异性,可用于HPV 6b感染的流行病学调查.
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