【摘 要】
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目的 克隆人Importin 8(IPO8)基因,观察IPO8与绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在宫颈癌细胞HeLa内的表达和定位.方法 以HeLa细胞总RNA为模板进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增全长IPO8编码序列,经Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后,插入GFP质粒pEGFP-C1,构建pEGFP-IPO8重组表达载体.瞬时转染重组质粒入HeLa细胞,荧光显微镜观察pE
【机 构】
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332000九江学院基础医学院江西省系统生物医学重点实验室,332000九江学院基础医学院江西省系统生物医学重点实验室,332000九江学院基础医学院江西省系统生物医学重点实验室,332000九江学院
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目的 克隆人Importin 8(IPO8)基因,观察IPO8与绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在宫颈癌细胞HeLa内的表达和定位.方法 以HeLa细胞总RNA为模板进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增全长IPO8编码序列,经Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后,插入GFP质粒pEGFP-C1,构建pEGFP-IPO8重组表达载体.瞬时转染重组质粒入HeLa细胞,荧光显微镜观察pEGFP-IPO8在细胞内的表达与定位.结果 测序结果显示经PCR扩增的IPO8编码序列完全正确,酶切显示重组质粒pEGFP-IPO8构建成功,荧光显微镜显示融合蛋白GFP-IPO8主要在细胞核内分布.结论 成功克隆IPO8基因并构建真核表达载体,证实GFP-IPO8蛋白主要定位于HeLa细胞核。
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我们比较不同空肠吻合术后的制模效果,探讨幼兔胆肠吻合术理想空肠吻合方式.一、材料与方法1.实验动物和主要器械:选取北京沙河通利实验动物养殖场所饲养的清洁级1月龄,体质量为(600 ±20)g的新西兰幼兔60只[许可证号SCXK(京)2010-004].北京大学医学部常规驱虫治疗,适应性喂养1周.依据空肠端-侧方式随机数字表法分为:单层连续缝合组(SLCSG)、单层间断缝合组(SLISG)、单层连续
近年来,椎间盘退变基因治疗的实验研究较多.既往基因转染多采用腺病毒载体,但其具有免疫原性高、转染率低的特点[1];我们采用腺相关病毒(AAV)介导骨形态发生蛋白(BMP)-7和性别决定区Y框蛋白9(SOX9)双基因体内转染退变兔椎间盘髓核细胞,探讨体内应用腺相关病毒介导正向调控因子对退变椎间盘基因治疗的可能性.一、材料与方法1.材料:健康成年新西兰大白兔15只(山东省实验动物中心提供),雌雄不限,
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