【摘 要】
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从原始质粒pDsRed2-1中分离红色荧光蛋白基因DsRed2、构建原核表达载体pGEX4T1-DsRed2,进行了原核表达.结果表明:目标DNA序列含有由678 bp构成的开放阅读框(ORF),编码由225个
【机 构】
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延边大学农学院,延吉,133002
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从原始质粒pDsRed2-1中分离红色荧光蛋白基因DsRed2、构建原核表达载体pGEX4T1-DsRed2,进行了原核表达.结果表明:目标DNA序列含有由678 bp构成的开放阅读框(ORF),编码由225个氨基酸构成的蛋白(红色荧光蛋白,简称RFP2).与参考序列相比,目标DNA序列在其ORF内存在一个单碱基的同义突变,所编码的目的蛋白氨基酸序列不变.DsRed2基因在常用的表达菌株BL21 (DE3)和克隆菌株DH5α中都能够表达出目的蛋白RFP2,使菌落呈现红色.在BL21 (DE3)中,在1～5h内,随诱导时间的延长,RFP2的表达量迅速增加,此后增加不明显.在原核细胞中表达出的RFP2,大多以难溶性包涵体形式存在,仅少量溶于细胞质中,但都能正常显示出红色.RFP2为单体红色荧光蛋白,且在自然光下即可激发出红色荧光;DsRed2作为报告基因,可以非常简单、方便地区分出阳性和假阳性菌落.
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