【摘 要】
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为建立犬呼吸道冠状病毒(Canine respiratory coronavirus,CRCoV)、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)3种病毒的多重PCR方法,根据
【机 构】
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浦东新区动物疫病预防控制中心 上海201299;上海交通大学农业与生物学院 上海200240;上海市浦东新区川沙新镇集体资产管理事务中心 上海201202;上海市动物疫病预防控制中心 上海201103
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为建立犬呼吸道冠状病毒(Canine respiratory coronavirus,CRCoV)、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)3种病毒的多重PCR方法,根据GenBank中CRCoV、CPV和CDV的基因序列,进行BLAST同源性分析,找出保守序列,并根据保守序列对每个病毒设计引物,建立扩增3种病毒的多重PCR方法,并通过已建立的方法对收集的呼吸道病犬病料进行检测.结果 表明,所建立的三重PCR体系组成为2×Taq Mix 12.5 μL,3对上、下游引物各0.6 μL,混合模板1 μL,ddH2O 7.9 μL;扩增程序为94℃ 5 min;94℃ 30 s,54℃ 1 min,72℃ 24 s,共35个循环;72℃ 8 min.该方法具有较高的灵敏性和特异性.临床验证实验表明,本实验所建立的多重PCR方法可用于临床诊断.
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