目的 观察野甘草醇(SDC)在人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对人膀胱癌细胞的体外杀伤中的增效作用.方法 测定胸苷激酶(TK)活性,应用高效液相色谱(HPLC)法测定三磷酸丙氧鸟苷(GCV-TP)在肿瘤细胞中的浓度,按转染倍数(MOI)=100加入Ad-hTERT-HSV-TK,24 h后分别加入5％血清培养液含GCV(200、100、50、10、5、l、0 mg/L),含SDC(0、0.04或0.20 μmol/L),应用于膀胱癌253J细胞,观察对膀胱癌细胞的杀伤作用.旁杀伤效应观察:将Ad-hTERT-HSV-TK按MOI=100转染253J细胞,24 h后将转染后的253J细胞和未转染的253J细胞以不同比例混合培养,共分11组(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、2∶1、2∶3、3∶1、3∶2、3∶4、4∶1、4∶3),在11组253J肿瘤细胞培养液中分别加入GCV使其浓度为100μmoL/L或浓度为100 μmol/L的GCV联合应用SDC 0.04μmoL/L,噻唑蓝(MTT)测定细胞存活率,观察旁杀伤作用.结果 SDC对转染Ad-hTERT-HSV-TK的膀胱癌253J细胞的TK酶活性影响不明显.应用高效液相色谱法分析,以单加GCV组的GCV-TP浓度记作100％.加入0.04 μmol/L SDC后,GCV-TP浓度变化差异无统计学意义(P＞0.05)；加入5倍治疗剂量0.20 μmol/L SDC后,GCV-TP浓度提高到(105.0±5.0)％,差异有统计学意义(P＜0.05).进一步细胞实验证实,SDC对Ad-hTERT-HSV-TK/GCV系统杀伤膀胱癌253J细胞具有增效作用,旁杀伤作用增强明显.结论 SDC对胸腺激酶依赖的GCV阻断膀胱癌进展有一定增效作用,将天然药物SDC与构建的具有肿瘤特异性的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV-TK/GCV系统联合应用,可以达到减毒增效的目的。
野甘草醇对胸腺激酶依赖的丙氧鸟苷阻断膀胱癌进展的增效作用
【摘 要】
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目的 观察野甘草醇(SDC)在人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对人膀胱癌细胞的体外杀伤中的增效作用.方法 测定胸苷激酶(TK)活性,应用高效液相色谱(HPLC)法测定三磷酸丙氧鸟苷(GCV-TP)在肿瘤细胞中的浓度,按转染倍数(MOI)=100加入Ad-hTERT-HSV-TK,24 h后分别加入5％血清培养
【机 构】
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050000石家庄,河北医科大学第二医院泌尿外科,050000石家庄,河北医科大学第二医院泌尿外科,050000石家庄,河北医科大学第二医院内科教研室,050000石家庄,河北医科大学第二医院泌尿外科
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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