【摘 要】
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实验目的 是构建藏系绵羊Smoothened (Smo)基因的皮肤特异表达载体和干扰载体,并探索其在毛囊细胞中的调控机制.试验从成年藏系绵羊(n=5)皮肤中克隆了Smo基因,获得的编码区长度为2342 bp,编码779个氨基酸,与绵羊预测的Smo基因在序列上高度相似;试验构建了该基因含KAP6.1启动子的皮肤特异表达载体pCDsRed2-KS和3个干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR Ⅰ-Ⅲ;随后转染体外培养的人毛囊内根鞘细胞(HHIRSC),获得的转染效率均在约40％,转染48 h后从HH
【机 构】
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西南民族大学畜牧兽医学院,四川成都610041
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实验目的 是构建藏系绵羊Smoothened (Smo)基因的皮肤特异表达载体和干扰载体,并探索其在毛囊细胞中的调控机制.试验从成年藏系绵羊(n=5)皮肤中克隆了Smo基因,获得的编码区长度为2342 bp,编码779个氨基酸,与绵羊预测的Smo基因在序列上高度相似;试验构建了该基因含KAP6.1启动子的皮肤特异表达载体pCDsRed2-KS和3个干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR Ⅰ-Ⅲ;随后转染体外培养的人毛囊内根鞘细胞(HHIRSC),获得的转染效率均在约40％,转染48 h后从HHIRSC中提取总RNA,用定量PCR检测Smo基因及Hh通路中Gli1和Gsk3β的mR-NA水平.结果 显示,藏系绵羊Smo基因在转染表达载体的HHIRSC中获得超表达,与对照组相比,其mRNA水平提高约5900倍,同时Gli1、Gsk3β基因的mRNA水平也表现出极显著上调(P＜0.01);构建的干扰载体转染HHIRSC后,对Smo基因的沉默效率均在98％以上,同时Gli1和Gsk3β的mRNA水平极显著下调(P＜0.01).本研究提示藏系绵羊Smo基因可能通过Hh通路影响毛囊细胞功能.
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