探讨CD40单链抗体(CD40ScFv)对辅助性T淋巴细胞(Th1)平衡的影响及其发挥抗肿瘤作用机制。
方法根据已获得的CD40ScFv基因片段，构建pET28a-CD40ScFv重组质粒，将重组质粒转化后诱导表达获得功能性CD40ScFv蛋白。体外诱导培养树突状细胞(DC)检测CD40ScFv对其活化成熟的促进作用，与CD4＋T淋巴细胞共培养后，检测共培养液中Th1/Th2比例。构建小鼠荷瘤模型，予CD40ScFv治疗并设立对照，观察并记录肿瘤体积变化，检测肿瘤微环境中白细胞介素-12(IL-12)浓度和Th1/Th2比例。
结果成功构建pET28a-CD40ScFv重组质粒及诱导表达CD40ScFv。不同条件激活的DC培养液中CD40ScFv组DC活化程度显著高于PBS组(CD80：P＝0.001，CD86：P＝0.000)，同时DC培养液上清中CD40ScFv组IL-12浓度为(674.37±73.59) pg/ml，显著高于PBS组(309.45±40.91) pg/ml(P＝0.001)，而与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＝0.737)。DC与CD4＋T细胞混合培养液中CD40ScFv实验组的Th1/Th2比值(9.98±1.78)显著高于PBS组(2.75±0.49)(P＝0.003)，而与肿瘤坏死因子(TNF)-α组比较差异无统计学意义(P＝0.872)。小鼠肿瘤微环境中CD40ScFv组IL-12的浓度[(396.27±48.13) pg/ml]显著高于NS组[(79.51±14.97) pg/ml](P＝0.000)，同时CD40ScFv组的Th1/Th2细胞比值为6.32±0.87，显著高于NS组(1.79±0.38)(P＝0.000)，而与激动型CD40mAb组比较差异无统计学意义(P＝0.400)。
结论构建pET28a-CD40ScFv重组质粒经诱导后可表达功能性CD40ScFv蛋白。CD40ScFv在体外通过促进DC的活化与成熟，诱导Th1细胞的极化，调整Th1/Th2比例，进而发挥抑制肿瘤增殖的作用。