【摘 要】
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目的 构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体并在GC-1 spg细胞中表达,为研究Tsarg1在生精过程中的机制提供实验基础.方法 应用RT-PCR从大鼠睾丸中扩增Tsarg1的开放阅读框(ORF),并
【机 构】
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湖南省长沙市第八医院,中南大学湘雅三医院
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目的 构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体并在GC-1 spg细胞中表达,为研究Tsarg1在生精过程中的机制提供实验基础.方法 应用RT-PCR从大鼠睾丸中扩增Tsarg1的开放阅读框(ORF),并将PCR产物插入到T载体中测序验证.随后,将Tsarg1 cDNA片段亚克隆入载体pEGFP-C3,筛选阳性克隆,构建pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体.脂质体介导重组体pEGFP-C3/Tsarg1转染GC-1 spg细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位.结果 成功构建了pEGFP-C3/Tsarg1真核表达质粒,EGFP-Tsarg1融合蛋白能够在GC-1 spg细胞中表达,Tsarg1蛋白定位于细胞胞浆.结论 pEGFP-C3/Tsarg1真核表达载体的成功构建及带GFP标签的Tsarg1融合蛋白在GC-1 spg细胞中的成功表达为进一步研究Tsarg1的生物学功能奠定了基础.
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