莫西沙星对大鼠气道平滑肌细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

来源 :中华结核和呼吸杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq3248893
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目的 观察大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)在不同浓度的莫西沙星作用下,其线粒体膜电位(△Ψm)和半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3(Caspase-3)表达及细胞凋亡的变化,探讨莫西沙星促进ASMC凋亡的可能机制。方法体外原代培养大鼠ASMC,按随机数字表法分为空白对照组、莫西沙星40 mg/L组(M40组)、80 mg/L组(M80组)、120 mg/L组(M120组)和200 mg/L组(M200组),均孵育48 h后,Annexin-V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,用JC-1荧光探针在免疫荧光显微镜下检测细胞△Ψm的变化,Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果各莫西沙星浓度组(M40组、M80组、M120组及M200组)的细胞凋亡率分别为(2.95±0.21)%、(7.39±0.63)%、(13.39±0.40)%和(21.20±1.42)%,均明显高于空白对照组的(0.94±0.05)%(均P<0.01),并存在浓度依赖性(r=0.974,P<0.01);荧光显微镜检测显示空白对照组以红色荧光为主,随着莫西沙星浓度增大,红色/绿色荧光强度值比率(分别为6.54±0.15、4.48±0.14、2.25±0.10和1.99±0.12)逐渐降低,与空白对照组(10.02±0.20)相比差异有统计学意义(均P<0.01),并存在药物浓度依赖性(r=-0.946,P<0.01);Western blot检测显示,空白对照组几乎无Caspase-3蛋白表达(0.31±0.03),各莫西沙星浓度组Caspase-3蛋白表达(分别为0.45±0.05、0.59±0.04、0.69±0.06和0.84±0.04)均明显高于空白对照组(0.31±0.03)(均P<0.01),同时也存在浓度依赖性(r=0.979,P<0.01)。各组细胞凋亡率与△Ψm水平呈负相关(r=-0.887,P<0.01),与凋亡蛋白Caspase-3水平呈正相关(r=0.955,P<0.01),各组细胞△Ψm水平与Caspase-3水平呈负相关(r=-0.951,P<0.01)。结论 莫西沙星可能通过影响大鼠AΨm促进ASMC凋亡。
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