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目的
建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。
方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞，G418筛选后建立稳定表达细胞株；酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测HBV抗原表达情况；FT-PCR检测HBV DNA载量；FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型；测序分析细胞株内HBV的基因变异情况。
结果成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系；第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定；第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于104copies/mL；耐药株变异类型为YVDD；测序显示，细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异。
结论成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系，即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞，为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型。