创伤弧菌溶细胞素蓖麻毒素B活性模序的预测、克隆表达和功能鉴定

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuan461618
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目的 研究克隆表达的创伤弧菌溶细胞素(vvC)中的重组蓖麻毒素B(rRicin B)功能模序,明确其功能,进一步阐明创伤弧菌溶细胞素的分子致病机制.方法 生物信息学预测VVC中的功能模序,构建pET28a-rRicin B原核表达系统,并通过IPTG诱导表达、三步洗涤、Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化、复性、ELISA检测和激光共聚焦显微镜检测FITC标记的rRicin B与Hela细胞相互作用等.结果 通过生物信息学预测到VVC中336~465位氨基酸序列可能存在蓖麻毒素B链的功能模序,克隆表达这段模序后,其相对分子质量为20×103,经ELISA法检测复性后蓖麻毒素抗原性为28.71 U/L;Hela细胞经FITC标记的rRicin B作用后其细胞膜表面和胞质均有绿色荧光产生.结论 VVC中存在具有类似天然蓖麻毒素B链功能的模序,能与细胞膜表面结合并进入胞质,可能与创伤弧菌溶细胞素膜成孔和细胞毒活性有关。

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