【摘 要】
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目的 制备堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）重组亚单位疫苗，并评价其免疫效果。方法 将堆型艾美耳球虫的保护性抗原基因cSZ1克隆至酵母表达载体pPICZαA，构建重组表达质粒pPICZαA-cSZ1，转化毕赤酵母菌株GS115，构建重组菌GS115-pPICZαA-c SZ1，经甲醇诱导表达重组蛋白cSZ1。按20、40、60μg/只（低、中、高剂量）经雏鸡肌肉注射重组蛋白，7
【基金项目】
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吉林省科技发展计划项目（20190301089NY,20190103075JH）； 石家庄市科学技术研究与发展计划项目（191500283A）；
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目的 制备堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）重组亚单位疫苗，并评价其免疫效果。方法 将堆型艾美耳球虫的保护性抗原基因cSZ1克隆至酵母表达载体pPICZαA，构建重组表达质粒pPICZαA-cSZ1，转化毕赤酵母菌株GS115，构建重组菌GS115-pPICZαA-c SZ1，经甲醇诱导表达重组蛋白cSZ1。按20、40、60μg/只（低、中、高剂量）经雏鸡肌肉注射重组蛋白，7 d后进行加强免疫，加强免疫7 d后经口感染E. acervulina孢子化卵囊，剂量为1×104个/只，同时设阳性对照组（未免疫仅攻虫）和阴性对照组（未免疫未攻虫）。攻虫后7 d检测雏鸡的抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）；初次免疫后7 d及加强免疫后7 d，经雏鸡心脏采血，分离血清，间接ELISA法检测血清抗体水平；攻虫后7 d，无菌取雏鸡脾脏，CCK-8法检测T淋巴细胞增殖情况。结果 经双酶切及测序鉴定，证明重组表达质粒构建正确；经菌落PCR及测序鉴定，证明重组菌构建正确。重组蛋白cSZ1的相对分子质量约19 000，可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。低、中、高剂量免疫组的ACI分别为171.25、176.42、174.33；与阴性对照组比较，低、中、高剂量免疫组雏鸡于初次免疫后7 d及加强免疫后7 d，血清抗体水平明显升高（P ＜0.01），攻虫后7 d,T淋巴细胞增殖率显著升高（P ＜0.01）。结论 制备的堆型艾美耳球虫重组亚单位疫苗对雏鸡有较好的免疫效果。
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