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【摘 要】随着临床免疫学不断发展，ELISA法比较灵敏，不需特殊设备，可以定性分析，所以应用发展迅速。但在实际工作中，可能会因操作不当而出现一些异常指标。总之，一点小小的疏忽、失误可能造成检验结果的偏差，给患者及家属带来物质精神上的损失，给临床确诊带来麻烦。
【关键词】ELISA；乙肝两对半；影响因素；结果分析
ELISA法广泛用于乙肝两对半检测，但ELISA测定中影响因素较多，有些因素会导致结果假阳性或假阴性，本文就ELISA测定乙肝两对半的影响因素及结果分析与对策讨论报告如下[ 1 ]：
1 样本采集与处理的影响
1.1 血样标本最好使用新鲜血清，必须严格进行标本查对制度。若无法当天检测，须将血清样本放入2℃～8℃冰箱保存，最长不要超过7天；若要长期保存的血清样本须放入-20℃冰箱冷冻保存，并且不可反复冻融，否则会直接影响结果的准确性。
1.2 标本凝固不全不可使用，正常血液采集后1/2～2h开始凝固，18～24h血块完全收缩。在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉，易造成假阳（阴）性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
1.3 标本溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，可出现非特异性反应，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。
2 试剂的影响
乙肝两对半试剂厂家较多；不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定差别，使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。因此，选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
3 操作技术的影响
3.1 选择准确的加样器及一次性吸嘴加样，将血清加在板孔底部，不要产生气泡。酶结合物使用前应摇匀并弃去1～2滴后垂直滴入，用振荡器震荡使其充分混匀，孵育时一定要封板防止样本和酶结合物蒸发，且严格孵育温度与时间以免影响结果，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异；尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。
3.2 冼涤是ELISA操作的重要环节，洗板时：①洗板不彻底，未除去实验中没参与反应的酶类物质，造成HBsAg、HBsAb和HBeAg的假阳性；或HBeAb和HBcAb的假阴性。②加注洗涤液时冲力过 ；将包被在固相载体表面的成分脱落导致HBsAg、 HBsAb、HBeAg假阴性；或HBeAb和HBcAb的假阳性。
4 干扰物质的影响
有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果；常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig （s）抗体、交叉反应物质和其它物质等。如RF因子可与标记二抗的FC段法结合造成假阳性，补体从C1q活化，使一抗和酶标二抗的抗体分子发生变构，Fc的C1q分子结合点暴露出来，则补体C1q可将二者连接起来造成假阳性，采用56℃30分钟灭活补体可降低假阳性率，高浓度的AFP（如孕妇），在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深影响检测结果。
5 药物的影响
5.1 高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAg形成复合物，影响HBsAg的检出，所以一些HBsAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现，如我们常遇到乙肝大三阳的孕妇，为阻断乙肝母婴垂直传播时，在孕第8、9、10月常规注射200mg乙肝免疫球蛋白，不仅影响孕妇HBsAg的检出；而且其所生产的生新儿也常出现HBsAg阴性，HBeAg 阳性和HBcAb阳性等少见模式、可能是乙肝免疫球蛋白属IgG抗体能通过胎盘进入胎儿体内与胎儿血液中的HBsAg结合形成复合物；则新生儿HBsAg检测呈阴性；用0.5M的盐酸处理标本1小时可提高出率[2]。
5.2 为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗后的1～2周内，血清中可检出HBsAg成份，形成一过性HBsAg阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，有方法能够把它检出；如电化学发光法，建议接种乙肝疫苗后1个月内不应作HBsAg检测。总之，乙肝两对半检测必须排除各种影响因素的干扰才能为临床提供正确可靠的检测结果。
总之，一点小小的疏忽、失误可能造成检验结果的相悖，给患者及家属带来物质和精神上的损失，给临床确诊带来麻烦。因此，作为检验工作人员，工作中要尽量减少失误，严格遵守操作规程，并及时总结经验，提高我们的检验工作水平，为临床提供可靠的诊断依据和结果。
参考文献
[1]赵长春，王庭检. 临床免疫检验学[M].天津科学技术出版社，2001：58-82.
【关键词】ELISA；乙肝两对半；影响因素；结果分析
ELISA法广泛用于乙肝两对半检测，但ELISA测定中影响因素较多，有些因素会导致结果假阳性或假阴性，本文就ELISA测定乙肝两对半的影响因素及结果分析与对策讨论报告如下[ 1 ]：
1 样本采集与处理的影响
1.1 血样标本最好使用新鲜血清，必须严格进行标本查对制度。若无法当天检测，须将血清样本放入2℃～8℃冰箱保存，最长不要超过7天；若要长期保存的血清样本须放入-20℃冰箱冷冻保存，并且不可反复冻融，否则会直接影响结果的准确性。
1.2 标本凝固不全不可使用，正常血液采集后1/2～2h开始凝固，18～24h血块完全收缩。在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉，易造成假阳（阴）性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
1.3 标本溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，可出现非特异性反应，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。
2 试剂的影响
乙肝两对半试剂厂家较多；不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定差别，使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。因此，选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
3 操作技术的影响
3.1 选择准确的加样器及一次性吸嘴加样，将血清加在板孔底部，不要产生气泡。酶结合物使用前应摇匀并弃去1～2滴后垂直滴入，用振荡器震荡使其充分混匀，孵育时一定要封板防止样本和酶结合物蒸发，且严格孵育温度与时间以免影响结果，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边与内部孔结果差异；尽可能使用水浴，并要求固相板放入水中，减少受热不均，贴密封膜，防止污物浸入。
3.2 冼涤是ELISA操作的重要环节，洗板时：①洗板不彻底，未除去实验中没参与反应的酶类物质，造成HBsAg、HBsAb和HBeAg的假阳性；或HBeAb和HBcAb的假阴性。②加注洗涤液时冲力过 ；将包被在固相载体表面的成分脱落导致HBsAg、 HBsAb、HBeAg假阴性；或HBeAb和HBcAb的假阳性。
4 干扰物质的影响
有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果；常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig （s）抗体、交叉反应物质和其它物质等。如RF因子可与标记二抗的FC段法结合造成假阳性，补体从C1q活化，使一抗和酶标二抗的抗体分子发生变构，Fc的C1q分子结合点暴露出来，则补体C1q可将二者连接起来造成假阳性，采用56℃30分钟灭活补体可降低假阳性率，高浓度的AFP（如孕妇），在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深影响检测结果。
5 药物的影响
5.1 高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAg形成复合物，影响HBsAg的检出，所以一些HBsAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现，如我们常遇到乙肝大三阳的孕妇，为阻断乙肝母婴垂直传播时，在孕第8、9、10月常规注射200mg乙肝免疫球蛋白，不仅影响孕妇HBsAg的检出；而且其所生产的生新儿也常出现HBsAg阴性，HBeAg 阳性和HBcAb阳性等少见模式、可能是乙肝免疫球蛋白属IgG抗体能通过胎盘进入胎儿体内与胎儿血液中的HBsAg结合形成复合物；则新生儿HBsAg检测呈阴性；用0.5M的盐酸处理标本1小时可提高出率[2]。
5.2 为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗后的1～2周内，血清中可检出HBsAg成份，形成一过性HBsAg阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，有方法能够把它检出；如电化学发光法，建议接种乙肝疫苗后1个月内不应作HBsAg检测。总之，乙肝两对半检测必须排除各种影响因素的干扰才能为临床提供正确可靠的检测结果。
总之，一点小小的疏忽、失误可能造成检验结果的相悖，给患者及家属带来物质和精神上的损失，给临床确诊带来麻烦。因此，作为检验工作人员，工作中要尽量减少失误，严格遵守操作规程，并及时总结经验，提高我们的检验工作水平，为临床提供可靠的诊断依据和结果。
参考文献
[1]赵长春，王庭检. 临床免疫检验学[M].天津科学技术出版社，2001：58-82.