固肺消积饮上调外泌体microRNA-186-5p表达抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

来源 :中国免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yang759152944
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目的:研究外泌体途径在固肺消积饮抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭中的作用,及microRNA-186-5p(miR-186-5p)在其中的作用机制.方法:制备固肺消积饮含药血清和无药血清,分别诱导A549细胞、转染miR-186-5p NC的A549细胞、转染miR-186-5p inhibitor的A549细胞,获得4种外泌体,即NC-Exo、XJD-Exo、XJD-miR-186-5p NC-Exo、XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo.透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测CD63、TSG101和Calnexin表达;荧光标记法检测A549细胞摄取外泌体情况;RT-qPCR检测外泌体中miR-186-5p表达.实验分为:A组(A549细胞+PBS)、B组(A549细胞+NC-Exo)、C组(A549细胞+XJD-Exo)、D组(A549细胞+XJD-miR-186-5p NC-Exo)、E组(A549细胞+XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo).Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白表达.结果:外泌体呈典型囊泡状,高表达表面标志物CD63和TSG101,低表达Calnexin,荧光标记的外泌体可被A549细胞大量摄取至胞浆内.NC-Exo、XJD-miR-186-5p inhibitor-Exo细胞miR-186-5p表达低于XJD-Exo、XJD-miR-186-5p NC-Exo细胞(P<0.05).A、C、D组迁移、侵袭能力低于B、E组(P<0.05).A、C、D组E-cadherin表达高于B、E组,N-cadherin、vimentin表达低于B、E组(P<0.05).结论:固肺消积饮可通过上调外泌体miR-186-5p表达抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭.
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