背景 年龄相关性白内障的发生、发展与长期氧化应激导致的细胞凋亡有关.研究表明,过氧化氢(H2O2)处理体外培养的细胞后可激活细胞内的黏着斑激酶(FAK)信号通路,从而影响细胞的增生与凋亡.研究FAK对氧化应激晶状体上皮细胞(LECs)的影响在年龄相关性白内障的预防方面有重要意义. 目的 研究H2O2对LECs中FAK表达的影响,探讨FAK对细胞的调控功能. 方法 用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液在体积分数5％CO2培养箱中常规培养人LECs株HLECs-B3,不含H2O2的为阴性对照组,在含不同浓度(30、50、70、100、300、500、700、1000 μmol/L)H2O2的培养基作用24 h,采用CCK-8法检测各组细胞的存活率；对细胞进行FITC免疫荧光染色,荧光显微镜下观察各组细胞的形态变化及细胞内FAK的表达分布；观察Hoeehst33258染色的细胞核,评估各组细胞的凋亡情况；采用Western blot法技术半定量检测各组细胞内FAK蛋白的表达量及其磷酸化水平. 结果 对照组,30、50、70、100、300、500、700、1000 μmol/L H2O2组HLECs-B3细胞的存活率分别为(1.00±0.03)％、(1.24±0.03)％、(1.36±0.24)％、(0.93±0.02)％、(1.75±0.19)％、(1.37±0.18)％、(0.64±0.01)％、(0.59±0.11)％、(0.14±0.05)％,各组间细胞存活率的差异有统计学意义(F=95.30,P=0.oo),其中300 μmol/L以下的各H2O2组细胞存活率均明显高于对照组,而＞500 μmol/L的各H2O2组细胞存活率均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度H2O2刺激24 h后,各组HLECs-B3细胞形态由多边形变为长梭形,并伸出伪足,FAK在细胞中呈绿色荧光,其分布随H2O2浓度的变化而发生改变.1000 μmol/L H2O2作用细胞24 h,可见细胞碎片,细胞发生凋亡.Western blot法检测发现,不同浓度H2O2处理HLECs-B3 24 h后,细胞中FAK的表达量明显不同,总体差异有统计学意义(F=28.08,P=0.00),其中＜300 μmol/L的各H2O2组细胞中FAK的表达量明显高于对照组,而＞500 μmol/L的各H2O2组细胞中FAK的表达量明显低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度H2O2作用3h时测得的磷酸化FAK (p-FAK)水平明显高于作用30 min时的测量值,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 H2O2可对LECs的存活和形态产生影响,并伴有FAK表达量及其磷酸化水平的改变,提示FAK参与了H2O2对细胞生物学行为的调控过程。