【摘 要】
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目的 建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探讨该方法 的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点.方法 取C57及BALB/C小鼠脾脏制备
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目的 建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探讨该方法 的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点.方法 取C57及BALB/C小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57-BALB/C小鼠皮肤移植排斥模型,不同时间点(分别为输注后1、2、4、10 h、1、2、3、6 d),流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/C小鼠为对照组,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率:%specific lysis=1-donor cells/recipient cells×100%.结果 CFSE染色时需要较大浓度差才能完全把两群脾细胞完全分离开,在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰;即CFSE低浓度用0.3 μmol/L,高浓度用6 μmol/L.C57-BALB/C皮肤移植排斥模型在皮肤移植后两周即可建立,混合细胞悬液输注后,模型组与对照组输注混合细胞后1、2、4、10 h、1、2 d特异性杀伤率差异有统计学意义(t=39.5、41.1、26.2、27.4、15.8、5.5,P均＜0.01).模型组输注后1 h和2 h杀伤率分别高达(87.4±4.5)%、(92.2±3.9)%.结论 供体特异性体内免疫状态定量检测方法 流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果 没有影响,输注细胞后2～4h为最佳检测时间点,体内细胞毒性实验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法.
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