【摘 要】
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目的：应用规律成簇间隔短回文重复序列（CRISPR/Cas9）技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法：根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向
【机 构】
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贵州医科大学免疫学教研室,贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81360349）, 贵州省应用基础研究计划重大专项子课题[黔科合J重大字（2015）2003], 贵州省普通高等学校创新人才团队建设项目,黔教合人才团队字[2015]
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目的：应用规律成簇间隔短回文重复序列（CRISPR/Cas9）技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法：根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA（sgRNA）,利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^TM核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除
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