烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备

来源 :昆虫学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lixuechao0926

【摘要】

：

将烟草天蛾Manducasexta几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-28a,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达.表达菌株经0.5 mmol/L IPTG诱导6～8 h后,几丁质酶表达并形成包

【作者】

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郝婵娟柴宝峰王伟孙毅梁爱华

【机构】

：

山西大学生物技术研究所,山西省农业生物技术研究中心

【出处】

：

昆虫学报

【发表日期】

：

2005年3期

【关键词】

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烟草天蛾几丁质酶原核表达变性和复性 Western印迹抗体制备

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目(39970416,30270204,30300038);山西省自然科学基金项目(031010)

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将烟草天蛾Manducasexta几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-28a,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达.表达菌株经0.5 mmol/L IPTG诱导6～8 h后,几丁质酶表达并形成包涵体.在Ni2+-NTA亲和柱上经变、复性和纯化,得到可溶的几丁质酶.表达产物经Western印迹鉴定.采用切胶回收的方法切割回收包涵体,并将回收产物免疫新西兰大白兔,ELISA检测抗体效价达1:20 000.Western印迹检测证明抗体特异性良好.

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