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目的 探讨以内含子A增强外源抗原在真核细胞中的表达效率及其对DNA疫苗在小鼠中免疫原性的影响.方法 以分枝杆菌热休克蛋白65 (Hsp65)为模式抗原,将其分别克隆入含有内含子A和不含内含子A的真核表达载体pCMV4.0和pVAX1,将表达Hsp65的不同重组质粒瞬时转染人胚肾上皮细胞系293T并免疫接种BALB/c小鼠,应用ELISA分析其所诱导产生的抗原特异性抗体水平及亚类,并以酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和胞内细胞因子染色技术(ICS)分析其诱导产生的细胞免疫应答反应.结果 含有内含子A的重组表达质粒pCMV4.0hsp65较之不含内含子A的pVAX1 hsp65在293T细胞中的抗原表达量更高,免疫小鼠6周后诱导产生的抗-Hsp65特异性总IgG抗体水平(3.76 ±0.23对3.15 ±0.22,P＜0.01)和IgG2a/IgG1比值(4.08 ±0.04对2.23±0.12,P＜0.01)也更高,差异有统计学意义；分泌γ-干扰素(IFN-γ)的CD4+T淋巴细胞频率[(2.0±0.058)％对(1.5±0.087)％,t=4.804,P＜0.01]和CD8+T淋巴细胞频率[(0.6±0.058)％对(1.0±0.115)％,t=3.098,P＜0.05]增加,差异有统计学意义,提示其诱导产生了增强的Th1型免疫应答.结论 内含子A可增强分枝杆菌Hsp65在真核细胞中的表达效率并可提高DNA疫苗在小鼠中的免疫原性。