【摘 要】
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目的 研究BALB/c鼠肝枯否细胞分离、培养和鉴定.方法 选用健康雌性8～10 w龄鼠,麻醉无菌取肝,D-Hanks液注射冲洗去血并剪去部分结缔组织,剪碎肝组织,加入链霉蛋白酶E和I型胶原
【机 构】
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华南肿瘤学国家重点实验室;中山大学肿瘤防治中心腹科,广州,510060;
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目的 研究BALB/c鼠肝枯否细胞分离、培养和鉴定.方法 选用健康雌性8～10 w龄鼠,麻醉无菌取肝,D-Hanks液注射冲洗去血并剪去部分结缔组织,剪碎肝组织,加入链霉蛋白酶E和I型胶原酶,水浴振荡消化,再加入DnaseⅠ,共同消化.不锈钢筛网滤过,用0.005%Dnase Ⅰ的1640液清洗细胞液,加Tris-NH4CL溶解红细胞.30%～70%Percoll梯度离心,用含10%FCS的RPMI-1640贴壁培养4～6 h洗去非贴壁细胞.通过吞噬墨水实验鉴定枯否细胞.结果 枯否细胞的数量为(1.07±0.87)×107/g,贴壁率40.3%,用0.4%台盼蓝染色鉴定,细胞存活率在95%以上,吞噬实验发现90%的贴壁细胞具有吞噬功能,即KC的纯度可达90%.贴壁的枯否细胞的形态多样,已经完全伸出了伪足并且伸展贴壁,呈多边形、多角形或者梭形等不规则形状,并且胞浆内可见吞噬的微粒状物质.结论 酶消化水浴振荡法结合梯度离心和贴壁培养是分离BALB/c鼠枯否细胞的可靠方法,为进一步实验打下了基础.
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