丙型肝炎病毒ns3区全长基因在大肠杆菌中的高效表达及纯化

来源 :生物技术通讯 | 被引量 : 0次 | 上传用户：xpz_peng

【摘要】

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利用PCR技术扩增HCV ns3基因,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb

【作者】

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杨敬薛小平雷迎峰尹文吕欣徐志凯

【机构】

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第四军医大学

【出处】

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生物技术通讯

【发表日期】

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2005年1期

【关键词】

：

丙型肝炎病毒非结构区原核表达纯化抗原性 ns3基因 hepatitis C virus non-structure 3 protein prokar

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利用PCR技术扩增HCV ns3基因,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为一抗行Western-Blot证实特异性和抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要

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