家蚕C类清道夫受体BmSR-C的基因克隆、原核表达及亚细胞定位

来源 :昆虫学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:w_mz2007
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
【目的】本研究旨在克隆与鉴定家蚕Bombyx mori C类清道夫受体基因BmSR-C,为探析其在家蚕免疫中的功能奠定基础。【方法】利用RACE技术克隆家蚕C类清道夫受体基因全长序列,并对其进行生物信息学分析。利用RT-PCR和qPCR方法对BmSR-C基因的时空表达情况进行检测。通过原核表达和Ni~+亲和层析的方法获得BmSR-C重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗BmSR-C多克隆抗体。利用ELISA法和Western blot分别对鼠抗BmSR-C蛋白多克隆抗体的效价和特异性进行检测。构建家蚕BmSR-C的真核表达载体,转染家蚕BmE细胞,分析该蛋白的亚细胞定位情况。【结果】克隆获得家蚕BmSR-C基因(GenBank登录号:BGIBMGA004577),其开放阅读框(ORF)全长为1 821 bp,编码606个氨基酸残基。BmSR-C具有典型的C类清道夫受体家族结构特征,主要由CCP, MAM和SO结构域以及靠近C端的单次跨膜结构域组成。进化分析结果显示鳞翅目昆虫SR-C单独聚为一支,家蚕BmSR-C与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda和大红斑蝶Danaus plexippus的同源蛋白亲缘关系最为接近。对BmSR-C基因的时空表达分析表明,BmSR-C在家蚕的马氏管和血细胞中高表达,而在其他组织中无明显表达;其在家蚕不同发育时期的血细胞中均有表达,且在4龄眠期的表达量达到峰值。ELISA检测结果显示,所制得抗体效价高达1∶128 000;Western blot检测结果显示,该抗体可以特异性识别重组蛋白。家蚕BmE细胞中的亚细胞定位结果表明BmSR-C主要定位于细胞膜。【结论】获得家蚕C类清道夫受体基因BmSR-C的完整cDNA序列及其表达特征;成功制备了BmSR-C的多克隆抗体,利用家蚕BmE细胞在细胞水平上分析了BmSR-C的亚细胞定位情况,推测其参与家蚕的生长发育及病原微生物入侵的免疫反应,为进一步研究BmSR-C的生物学功能奠定了基础。
其他文献
目的设计经口咽前路寰枢椎复位钢板系统(transoralpharyngeal atlantoaxial reduction plate,TARP),评价其生物力学性能,观察临床应用效果.方法研制设计一种新型的经口咽前路
<正>蒙内铁路沿线红线征地范围内的具体土地权属情况相对复杂,有相当一部分土地权属不明,难以确认地权人,也有不少地权重叠部分,且无名称编号。"一带一路"倡议提出4年来,中国
目的探讨基于情景的角色扮演法在社区护理实践教学中的应用和效果。方法对山西中医学院2014级397名护理本科生在社区实践教学中采用基于情景的角色扮演法,通过问卷调查、实践
本研究针对教室灯光的控制方法,尤其是教室灯光的智能控制方面的发展现状,分析了教室灯光智能控制的可行性及实施方案。采用LM393电压比较器构成的电路检测环境光的强度;根据
演讲摘录关于5G,某客户谈到一个观点“现在我们考虑凡是不能向5G演进的或者凡是不能走向5G的,后期网络则不准备大规模推广,如果能向5G演进的就大规模推广。”这也从某个侧面
饮用水水源的污染日益严重,对人类的健康带来了极大的危害,对净水技术提出了新的挑战。常规水处理工艺对城市生活污水、化工污水的净化很难达到排放标准,膜生物反应器污水处
目的:研究知母皂苷对谷氨酸所致痴呆模型小鼠学习记忆能力、脑内胆胺类递质和海马内pAPP阳性神经元的影响,以期探讨知母皂苷抗老年性痴呆的作用机制。方法:用谷氨酸致老年性痴呆
初中生的音乐学习是为了开发其音乐潜能并使之从中受益,由于种种原因出现的音乐后进生,是可以转变的,作为教师务必设法引导并转化他们,让他们对音乐感兴趣,对音乐学习有自信
本文介绍了膜分离技术及其特点,对膜分离技术进行了分类,同时阐述了液膜、电渗析、微滤、超滤、反渗透和纳滤膜分离技术在重金属废水中的研究和应用情况。
4外周动脉闭塞性疾病4.1流行病学外周动脉闭塞症可分为急性与慢性两种类型。前者多由心血管疾病或异物引起,后者多由动脉粥样硬化或血栓闭塞性脉管炎(Buerger病)引起。临床上以慢