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目的：制备高纯度、酶解效率高、酶切位点专一的测序级胰蛋白酶，应用于蛋白组学研究的蛋白质鉴定与分析中。方法：取实验室自制的猪胰蛋白酶粗酶，经硼氢化钠、甲醛还原甲基化修饰抑制胰蛋白酶自水解，采用高效液相色谱仪15RPC反相柱纯化，收集对应的甲基化胰蛋白酶峰组分，冷冻干燥；甲基化修饰的胰蛋白酶进一步经甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）修饰，以抑制糜蛋白酶等非特异性酶切活性，并经反相色谱柱再纯化，获得终产物即质谱测序级胰蛋白酶；自制的测序级胰蛋白酶经SDS-PAGE、HPLC反相色谱分析、酶比活力测定，并应用于胶