【摘 要】
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目的 部分纯化伞枝犁头霉分泌的毒力因子,并研究其诱导人血管内皮细胞凋亡的机制.方法 用Con A Lectin亲和层析法纯化伞枝犁头霉分泌的糖蛋白,并在流式细胞仪下检测不同蛋白
【机 构】
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四川省医学科学院四川省人民医院皮肤病性病研究所
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目的 部分纯化伞枝犁头霉分泌的毒力因子,并研究其诱导人血管内皮细胞凋亡的机制.方法 用Con A Lectin亲和层析法纯化伞枝犁头霉分泌的糖蛋白,并在流式细胞仪下检测不同蛋白成分对人血管内皮细胞凋亡的影响.用变性和非变性法去除伞枝犁头霉糖蛋白的糖基,并分别检测其蛋白和寡糖成分诱导凋亡的活性.Western blot法分析伞枝犁头霉糖蛋白诱导人血管内皮细胞caspase激酶活化情况.用caspase抑制剂检测caspase-8和-9在凋亡反应中的作用.XTT法检测caspase抑制剂能否终止细胞存活率的抑制.结果 流式细胞仪分析显示伞枝犁头霉分泌的总蛋白和糖蛋白能以剂量依赖的方式诱导人血管内皮细胞凋亡,而非糖蛋白则无此活性.纯化的去糖基化蛋白和寡糖成分都不能独立诱导人血管内皮细胞凋亡.在凋亡信号传导途径中,caspase-9、-3和细胞色素C显著活化,而caspase-8未见活化.Caspase-9抑制剂能够终止伞枝犁头霉糖蛋白诱导的凋亡反应,而caspase-8抑制剂则无此效应.Caspase-9和-3抑制剂终止了人血管内皮细胞活性下降.结论 伞枝犁头霉分泌的糖蛋白具有诱导人血管内皮细胞凋亡的活性.糖蛋白结构的完整性对其诱导凋亡的活性是必需的.内源性凋亡信号传导途径介导了伞枝犁头霉糖蛋白诱导的凋亡反应.
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