观察S期激酶相关蛋白2(SKP2)基因沉默对人脑胶质瘤细胞U251生物学特性的影响,探讨其可能的机制。
方法体外培养U251细胞,分为3组,分别加入Ad-shSKP2(shSKP2组)、Ad-shNC(shNC组)及磷酸盐缓冲液(PBS,对照组),采取细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化,划痕实验和Transwell侵袭实验观察细胞迁移和侵袭的变化,Western blot测定U251细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2的蛋白表达的变化。
结果Ad-shSKP2转染24、48、72 h后shSKP2组的细胞存活率分别是对照组的(87.17±2.60)%、(79.63±1.74)%和(72.81±1.78)%,而shNC组的细胞存活率无显著性变化。shSKP2组、shNC组及对照组的凋亡率分别为(18.27±2.44)%、(1.51±1.02)%和(1.11±1.20)%,G2/M期比例分别为(26.65±2.51)%、(14.46±2.58)%和(14.89±3.81)%。shNC组和shSKP2组的24 h迁移距离分别为对照组的(93.45±16.77)%及(43.69±7.44)%,对照组、shNC组和shSKP2组24 h通过Transwell小室的过膜细胞数(每200倍视野)分别为(87.50±5.66)、(79.78±8.03)、(38.24±6.64)个。Western blot显示,shSKP2组较对照组及shNC组bax表达上调,bcl-2、MMP-9、MMP-2蛋白表达下降。
结论Ad-shSKP2可抑制U251细胞的体外增殖,可诱导U251细胞凋亡、引起G2/M期阻滞,减弱细胞的迁移及侵袭能力。Ad-shSKP2可使U251细胞bcl-2/bax比值的降低以及MMP-9和MMP-2蛋白的表达降低。