人参根腐病菌原生质体制备优化及绿色荧光蛋白基因转化

来源 :吉林农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weiyuanbin
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通过摸索孢子萌发条件,不同酶浓度及不同酶系组成来研究人参根腐病菌——尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)原生质体制备技术。酶解温度37℃,裂解3.5 h,渗透压稳定剂是0.7 mol/L NaCl的条件下,崩溃酶、细胞溶解酶、纤维素酶和蜗牛酶分别为0.5%、0.25%、1%和1.5% 酶解5%(g/mL)的菌丝可以获得2.8×107个/mL原生质体。用PEG介导外源DNA随机插入的方法,成功获得具有绿色荧光信号和潮霉素筛选标记的转化子,阳性转化率为62%.选取FOG1菌株经过6代继代培养后,菌落形态、产孢量和绿色荧光蛋白的表达无明显差异。因此,利用聚乙二醇PEG为媒介的遗传转化体系是稳定高效的遗传转化体系。
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