【摘 要】
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目的:建立白芷的ISSR最佳反应体系及PCR扩增参数,为今后利用ISSR标记技术进行白芷鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序。方法:以白芷基因组DNA为模板,分析了ISSR反应
【机 构】
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成都中医药大学药学院,四川大学生命科学院
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目的:建立白芷的ISSR最佳反应体系及PCR扩增参数,为今后利用ISSR标记技术进行白芷鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序。方法:以白芷基因组DNA为模板,分析了ISSR反应体系中模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度,TaqDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响。结果:建立了重复性好,分辨率高的ISSR反应体系,即在25μL反应体系中,模板DNA浓度为10~30 ng,2.5μL 10×PCR buffer(Mg2+free),MgC l22.0 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1.0U,引物0.6μmol/L;扩增程序为:94℃预变性5 m in;94℃变性30 s,引物在筛选后的最佳退火温度退火45 s,72℃延伸2m in,共计39个循环,循环结束后在72℃延伸5 m in。结论:建立了适用于白芷的ISSR反应体系,为今后利用ISSR标记技术开展白芷遗传变异分析和构建遗传图谱奠定了基础。
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