克隆猪IgG Fc受体基因(FcRn)及其剪接体基因,研究其与猪恒定链(Ii)的细胞定位及相互关系。利用Triozl法从猪十二指肠组织提取总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物与pMD-18T载体连接,筛选阳性克隆并序列测定和分析。进一步构建了融合表达绿色荧光蛋白的FcRn基因及其剪接体真核表达载体,利用脂质体Lipofectamine2000介导法与能表达红色荧光的Ii真核表达载体共转染COS-7细胞,共聚焦荧光显微镜检测FcRn基因与猪Ii链在细胞中的共定位,并通过免疫共沉淀进一步研究它们之间的相互关系。序列分析结果表明,FcRn基因序列大小为1 071bp,剪接体片段大小为795bp,两者氨基酸序列均含有胞外结构域、跨膜区和胞浆尾区。细胞定位研究显示,LFC-GFP或SFC-GFP与RFP-Ii共转染COS-7细胞后共定位在细胞的内膜系统。免疫共沉淀结果显示,GFP-Ii与LFC-GFP或SFC-GFP共转染后,检测到LFC-GFP或SFC-GFP的表达。猪Ii链与FcRn基因或剪接体能够形成复合体,共定位于细胞的内膜系统。