【摘 要】
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目的 构建腺病毒介导的小鼠可溶性endoglin(sEng)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)重组蛋白,观察其对内皮细胞管化及滋养细胞迁移的影响.方法 提取小鼠胎盘组织总RNA,
【机 构】
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江苏省常州市武进医院妇产科,南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科
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目的 构建腺病毒介导的小鼠可溶性endoglin(sEng)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)重组蛋白,观察其对内皮细胞管化及滋养细胞迁移的影响.方法 提取小鼠胎盘组织总RNA,通过RT-PCR获得sEng和sFlt-1 cDNA,插入到穿梭载体pAdTrack-CMV中,获得pATC-sEng和pATC-sFlt-1质粒,转化其至pAdeasy-1受体菌,选阳性克隆转染293A细胞,获得Ad/sEng和Ad/sFlt-1,制备高滴度病毒液.用病毒感染COS7细胞,检测sEng和sFlt-1蛋白表达,并通过成管和划痕实验观察两种蛋白对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)管化和BeWo细胞迁移的影响.结果 成功获得sEng和sFlt-1重组腺病毒,其滴度分别为2.2×1011pfu/ml和2.0×1011pfu/ml.感染COS7细胞后,sEng和sFlt-1蛋白均较高表达,并能抑制HUVEC管化及BeWo细胞迁移,两者有协同作用.结论 构建的腺病毒介导的小鼠sEng和sFlt-1重组蛋白对血管生成和滋养细胞迁移有明显抑制作用.
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