【摘 要】
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采用人的全长酪氨酸羟化酶cDNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增反应,获得编码N-端缺失141个氨基酸的催化结构域cDNA片段,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体pGEX-4T-1
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采用人的全长酪氨酸羟化酶cDNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增反应,获得编码N-端缺失141个氨基酸的催化结构域cDNA片段,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体pGEX-4T-1中,构建表达质粒pGEXTHc,同时构建其全长片段的表达质粒.pGEXTHa.两者分别转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导可高效表达,产物以可溶形式存在,经亲和层析纯化后以蛋白酶裂解,再经亲和层析分离得到较纯的酶蛋白,采用高效液相色谱法(HPLC-ECD)检测酶活性,结果证明催化结构域活性高于全酶,是全酶活性的2.96倍
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