研究骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对脑缺血后血管生成和神经功能恢复的影响。
方法采用全骨髓贴壁法进行BMSCs原代培养,流式细胞仪鉴定BMSCs阳性抗原(CD29和CD90)及阴性抗原(CD34和CD45);采用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血90 min再灌注,分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)和BMSCs组(n=12)。缺血后24 h,BMSCs组经尾静脉注射1 ml BMSCs(1×106/ml),假手术组和模型组经尾静脉注射1 ml PBS。在缺血后第1、7、14和28天分别采用改良的神经症状严重程度评分(mNSS)、角实验和粘胶揭除实验评价神经功能;缺血后第28天,采用甲苯胺蓝染色检测脑梗死体积;缺血后第14 d,免疫荧光检测缺血周边区微血管密度和血管内皮生长因子(VEGF)表达。
结果第3代BMSCs生长良好、形态均一,呈梭形,阳性抗原CD29、CD90表达率分别为98.3%、97.4%,阴性抗原CD34、CD45表达率分别为0.2%、4.8%;与模型组比较,BMSCs组大鼠在缺血后第7,14,28天mNSS评分显著降低(P<0.01),第14,28天右侧转身次数减少(P<0.05),第7天粘胶揭除时间显著缩短(P<0.05),脑梗死体积显著减少(P<0.01);缺血后第14天,模型组大鼠缺血周边区vWF阳性血管数量和VEGF免疫阳性细胞数量分别为(42.97±8.64)个/mm2,(54.83±10.66)个/mm2,而BMSCs组分别为(69.43±7.29)个/mm2,(78.70±6.16)个/mm2,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。
结论BMSCs移植能促进脑缺血后神经功能恢复,机制可能与其上调VEGF表达促进缺血周边区血管生成有关。