候选转移抑制基因通过调控肝细胞生长因子/c-Met信号通路影响膀胱癌BIU87细胞生物学功能的研究

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目的

观察候选转移抑制基因(MTSS1)通过调控肝细胞生长因子(HGF)/c-Met信号通路对膀胱癌BIU87细胞生物学功能的影响。

方法

培养膀胱癌BIU87细胞,将传代的细胞分为以下3组:A组:PEF MTSS1和PSV2neo共转染组;B组:阴性对照小干扰RNA(shNC)和PSV2neo共转染组;C组:未转染组,A组为实验组,B、C两组为阳性对照组和阴性对照组。通过Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测MTSS1蛋白和mRNA在3组细胞中的表达水平,并检测3组BIU87细胞中c-Met、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白和mRNA水平表达变化,并通过流式细胞法和划痕实验观察比较转染PEF MTSS1的BIU87细胞的的迁移能力和增殖凋亡情况。

结果

(1)Western blot和Real-time PCR检测结果显示:与B、C组比较,PEF MTSS1组MTSS1蛋白及mRNA表达均显著下调(P<0.01),c-Met蛋白及其mRNA的表达显著下调(P<0.01)。(2)Western blot和Real-time PCR检测结果显示:与B、C组比较,A组上皮标志物E-cadherin蛋白和及mRNA表达显著上调(P<0.01),c-Met蛋白及其mRNA,间质细胞标志物N-cadherin蛋白及mRNA的表达显著下调(P<0.01),B、C两组间E-cadherin和N-cadherin蛋白及mRNA表达的差异无统计学意义(P>0.01)。(3)划痕实验检测细胞迁移:结果表明,A组划痕间距较宽,愈合被抑制,BIU87细胞迁移能力低于B、C组细胞(P<0.01),B、C两组细胞的划痕间距差异无统计学意义(P>0.01)。(4)流式细胞仪分析细胞凋亡:A、B和C组细胞的凋亡率分别为(26.73±3.72)%、(4.28±0.68)%和(2.73±0.41)%,A组细胞的凋亡率较C组明显增加(P<0.01),B、C两组细胞凋亡的差异无统计学意义(P>0.05)。

结论

MTSS1基因转染对体外膀胱癌细胞株BIU87细胞具有促进增殖和抑制凋亡作用,其可能是通过调控HGF/c-Met信号转导通路来发挥作用。

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