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目的分离、纯化HPLC图谱中紧跟着9-（E）-红霉素A肟的一个未知的杂质，并鉴定它的化学结构。方法通过柱层析色谱法和重结晶法分离该杂质，然后通过1H-NMR、MS、X．射线单晶衍射确定了该杂质的结构。结果实验最终确定了该杂质最佳的分离条件：流动相为CHCl3：C2H5OH：NH4OH=10．0：1．2：0．1，重结晶的溶剂为氯仿和丙酮（V：V=7：3）。并用双倍稀释法对红霉素A肟和杂质红霉素E肟进行了抗菌活性研究。结论未知杂质为红霉素E的E式肟化产物，红霉素E肟的抗菌活性远低于红霉素A肟。