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为了利用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）更准确地测定发酵液中的生物素含量，以安捷伦Zorbax SB-C18（4．6cm×250cm，5μm）为色谱柱，对液相色谱紫外线检测波长和流动相的溶液配比、K2HPO4离子浓度和pH值进行筛选。结果表明，以体积分数91．5％K2HPO4（0．04mmol／L）与体积分数8．5％CH3CN混合液为流动相，在pH值为2．5和紫外检测波长为215nm的条件下，获得的生物素吸收峰面积与质量浓度的线性相关系数达0．9999，生物素加标回收率达99．07％～101