[欧阳为明，金伯泉，夏海滨，刘　飞，李德敏，张建平. 中华微生物学和免疫学 杂志，2001;21(1):58-61]rn　　目的　获得9.1C3胞内抗体基因的真核表达载体，观察胞内抗体对9.1C3分子表 达的抑制作 用，为进一步研究9.1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础. 方法　设计引 物，以9.1C3 ScF v基因为模板进行PCR扩增，引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标 记的Etag序列. 回收纯化PCR产物，酶切后连接到pUC19载体上，并进行序列测定. 序列正确 后 切下胞内抗体基因片段，重组到真核表达载体pRc/CMV中，酶切鉴定后用DEAE-dextran方法 瞬时转染真核细胞COS7，用胞内染色和Westem blot 方法检测胞内抗体的表达. 接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入9.1C3阳性的Jurkat细 胞，用FCM观察胞内抗体对9.1C3分子表达的影响. 结果　DNA序列测定证明 ，通过PCR成功地 为9.1C3 ScFv引入了内质网定位所需的信号肽、KDEL及E-tag序列，成功地构建了胞内抗体 真核表达载体，通过胞内染色方法和Westem blot证明胞内抗体在COS7中得到表达. 转入Jur kat细胞后发现胞内抗体能下调9.1C3分子的表达水平. 结论　以9.1C3 ScF v基因为模板PCR扩增得到9.1C3胞内抗体基因，并构建了真核表达载体.(井晓梅)