【摘 要】
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为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响，根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列（coding sequence,CDS），利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹技术验证ddx27基因的表达，并利用双荧光素酶试验验证ddx27基因的过表达对tp53基因转录活性的影响。结果显示，ddx27
【机 构】
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上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室/上海海洋大学国家水生动物病原库
【基金项目】
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国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”专项（2019YFD0900102）； 教育部留学回国人员科研启动基金（D-8002-15-0042）； 水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究（A1-3201-19-3013）；
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为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响，根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列（coding sequence,CDS），利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹技术验证ddx27基因的表达，并利用双荧光素酶试验验证ddx27基因的过表达对tp53基因转录活性的影响。结果显示，ddx27 CDS区及阳性克隆的电泳片段大小以及测序比对均与预期结果一致。蛋白质免疫印迹显示Ddx27重组质粒可正常表达，且蛋白大小与预测结果一致。亚细胞定位显示Ddx27蛋白表达于HEK293T细胞的细胞核中。而且，过表达pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体能够显著增强tp53启动子报告基因载体pGL3-tp53-Luc的活性，为对照组的1.8倍（P＜0.05）。以上结果表明，斑马鱼pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体构建成功，能够在哺乳动物的细胞核中表达，且ddx27基因可以促进tp53基因的表达。
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