【摘 要】
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目的探讨缺氧条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中Runx1(Runt-related transcription factor 1)的表达及其在细胞损伤和炎症分子表达调
【机 构】
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重庆医科大学干细胞与细胞工程研究室; 陆军军医大学高原军事医学系高原生理学与病理学教研室; 湖北省妇幼保健院生殖中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81270108)
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目的探讨缺氧条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中Runx1(Runt-related transcription factor 1)的表达及其在细胞损伤和炎症分子表达调控中的作用。方法采用缺氧工作站模拟缺氧环境(1%O2),常氧组细胞于普通培养箱(21%O2)中常规培养。采用qRT-PCR(Lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测培养上清LDH活性;以葡萄糖转运体-1(glucose transporter 1,Glut1)的转录水平反映缺氧诱导因子1(hypoxia induced factor 1,HIF-1)的转录活性,以Bcl-2/Bax蛋白比值反应细胞凋亡通路的活性。结果 qRT-PCR和Western blot的结果显示,与常氧组相比,缺氧组HUVEC细胞中Runx1持续高表达(P<0.05);经脯氨酸羟化酶抑制剂(dimethyloxalylglycine,DMOG)和去铁酰胺(desferrioxamine,DFX)处理后,常氧组HUVEC中缺氧诱导因子1亚基α(HIF-1α)蛋白和Glut1的mRNA水平增加,Runx1的mRNA也显著增加;分别干扰缺氧组HUVEC细胞和DFX处理组细胞中HIF-1α表达后,Runx1的mRNA显著下降,与各组干扰序列对照组相比,差异均有显著意义(P<0.05)。缺氧24 h时细胞培养上清的LDH活性显著升高,Bcl-2/Bax蛋白水平的比值显著下调,同时,缺氧组HUVEC与常氧组相比,差异均具有显著意义(P<0.05)。干扰Runx1表达后,缺氧组细胞培养上清中LDH活性显著降低,Bcl-2/Bax蛋白水平的比值显著上调,炎症分子mRNA水平显著下调,与各组对照组相比,差异均具有显著意义(P<0.05)。结论缺氧以HIF-1依赖的方式诱导血管内皮细胞中Runx1表达;Runx1通过介导血管内皮细胞损伤和炎症因子的表达,参与缺氧内皮细胞功能紊乱。
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