探讨NADPH氧化酶Nox-4在慢性束缚应激诱导胃黏膜炎症损伤发生中的作用。
方法雄性SPF级昆明小鼠随机分2组(每组10只)，即慢性束缚应激(Stress)组和正常对照(Control)组。Stress组小鼠每天在自制式束缚器中限制活动2 h，其余时间两组小鼠在相同环境中自由饮水摄食，实验持续14 d。通过HE染色在光镜下观察胃黏膜组织病理学改变，采用免疫组化方法观察Nox-4在小鼠胃黏膜中的表达，实时定量RT-PCR和Elisa法检测胃黏膜组织中Nox-4、抗氧化蛋白(Mn-SOD、GSH、Catalase)及炎性因子(IL-8、IL-1β、TNF-α)等指标的mRNA相对表达量及其在血液释放浓度。
结果Stress组小鼠胃黏膜固有层和腺体上皮内出现基底细胞增生，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及浆细胞浸润反应和炎性改变，而Control组小鼠胃黏膜未发现明显异常。Nox-4免疫染色阳性细胞在Stress组小鼠胃黏膜中表达较Control组染色深且丰富，主要表达于黏膜固有层及腺体上皮内。Stress组小鼠胃黏膜组织中Nox-4 mRNA表达水平是Control组的(2.42±0.51)倍，其血清释放浓度为Control组的(2.23±0.67)倍，差异有统计学意义(t＝－46.32，P<0.001)。两组小鼠胃黏膜抗氧化蛋白的RT-PCR实验结果显示，Stress组Mn-SOD、GSH、Catalase的mRNA转录水平明显低于Control组的分别为[Mn-SOD：(0.59±0.10)，GSH：(0.58±0.11)，Catalase：(0.57±0.09)倍]，差异有统计学意义(t＝13.51，11.67，15.01，P<0.01)。两组小鼠胃黏膜炎性因子的RT-PCR实验结果显示，Stress组IL-8、IL-1β、TNF-α的mRNA转录水平显著高于Control组的分别为(IL-8：1.47±0.34，IL-1β：1.48±0.42，TNF-α：1.51±0.37)倍，差异有统计学意义(t＝－18.45，－19.14，－20.85，P<0.001)。两组炎性因子(IL-8、IL-1β、TNF-α)的Elisa结果显示；Stress组炎性因子血清中释放水平明显上升，分别是Control组的(2.25±0.37)、(3.59±0.45)、(3.41±0.34)倍，均差异具有统计学意义(t＝ －47.11，－79.36，－96.32，P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示，Stress组Nox-4血清浓度与炎性因子(IL-8、IL-1β、TNF-α)血清浓度之间存在正相关(r＝0.97，0.99，0.98，均P<0.01)。Spearman等级相关分析胃黏膜炎症分级与血清Nox-4及炎性因子指标(IL-8、IL-1β、TNF-α)浓度呈正相关(r＝0.96，0.92，0.91，0.94，均P<0.01)。
结论慢性束缚应激引起Nox-4高水平表达，进而导致胃黏膜炎症性损伤。