【摘 要】
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目的 通过沉默细胞因子信号抑制因子-1(SOCS-1)与负载肿瘤抗原存活素(Survivin)及黏蛋白1(MUC1)联合的方法构建新型树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外抗前列腺癌(PCa)的免疫效应
【机 构】
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浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科, 杭州,310009310006,杭州市第一人民医院泌尿外科;浙江大学医学院附属第二医院临床研究中心, 杭州,310009;
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目的 通过沉默细胞因子信号抑制因子-1(SOCS-1)与负载肿瘤抗原存活素(Survivin)及黏蛋白1(MUC1)联合的方法构建新型树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外抗前列腺癌(PCa)的免疫效应.方法 分离健康人外周血单个核细胞,体外诱导培养成DC,再以携有SOCS-1小干扰RNA(siRNA)及Survivin、MUC1融合蛋白的重组人5型腺病毒载体去感染DC(感染复数=1000).反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测感染后DC中SOCS-1、Survivin及MUC1的表达;流式细胞学分析DC表型分子人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD83、CD1a、CD80和CD86;混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞增殖能力;酶联免疫吸附试验检测其分泌白细胞介素-12(IL-12)的水平,然后将DC与T细胞按1∶10比例共培养诱导成细胞毒性T细胞(CTL),乳酸脱氢酶释放法检测CTL分别在5∶1、10∶1、25∶1、50∶1等效靶比(E/T)下对PCa细胞的体外杀伤活性.结果 腺病毒感染DC效率为80％,感染后DC中SOCS-1表达受到明显抑制,Survivin及MUC1呈显性表达;成熟DC的表型分子HLA-DR、CD83、CD1a、CD80和CD86阳性率分别为(96.20±3.16)％、(75.20±2.63)％、(96.00±2.89)％、(96.80±2.77)％、(92.70±3.03)％,与未成熟DC组比较,表达显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).腺病毒感染组、阴性对照感染组及未感染组DC培养上清液中IL-12分泌水平分别为:(124.59±9.56)、(62.30±11.01)、(50.00±8.36) ng/L,可见新型DC疫苗IL-12分泌能力明显增强(P＜0.05);其诱导产生的CTL对PCa细胞DU-145的杀伤活性分别为:E/T=5∶1时为(22.56±1.23)％、E/T=10∶1时为(36.98±1.62)％、E/T =25∶1时为(55.40±2.96)％、E/T=50∶1时为(68.72±3.35)％,均明显高于对照组(P＜0.05).结论 沉默SOCS-1联合负载Survivin及MUC1的新型DC疫苗可有效诱导体外特异性抗PCa免疫效应.
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