【摘 要】
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本研究探讨5-氮杂胞苷对骨髓瘤细胞株中XAF1基因表达的影响及体外抗骨髓瘤细胞增殖效率.采用逆转录PCR方法检测骨髓瘤细胞株RPMI 8226和XG-7中XAF1基因的表达.采用甲基化特异
【机 构】
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苏州大学第一附属医院,河北医科大学第二医院血液科
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本研究探讨5-氮杂胞苷对骨髓瘤细胞株中XAF1基因表达的影响及体外抗骨髓瘤细胞增殖效率.采用逆转录PCR方法检测骨髓瘤细胞株RPMI 8226和XG-7中XAF1基因的表达.采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测XAF1基因CpG岛甲基化状态.采用0-5 μmol/L 5-氮杂胞苷处理骨髓瘤细胞株.采用CCK-8比色法检测5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞增殖抑制作用,应用Graphpad 5.0软件分析5-氮杂胞苷对骨髓瘤细胞的生长抑制作用.采用Annexin V/7-AAD染色流式细胞仪检测细胞凋亡.结果表明:XG-7细胞不表达XAF1 mRNA,RPMI8226细胞表达XAF1 mRNA转录本1和2.XG-7和RPMI 8226细胞株XAF1基因启动子CpG岛均存在过甲基化.XG-7和RPMI 8226细胞株经2.5 μmol/L 5-氮杂胞苷处理72 d、时后仅表达XAF1 mRNA转录本1,并且XAF1基因启动子CpG岛甲基化程度降低.5-氮杂胞苷抗骨髓瘤作用呈时间和浓度依赖性.5-氯杂胞苷处理48小时抑制XG-7骨髓瘤细胞株的IC50值为2.6 μmol/L.1.0、2.0、2.5、5.0 μmol/L浓度的5-氮杂胞苷处理XG-7细胞48小时后诱导细胞凋亡率分别为(34.3±8.0)%,(54.8±3.1)%,(64.1±3.4)%,(81.0±4.1)%.1.0-4.0 μmol/L5-氮杂胞苷与1.0-4.0 μmol/L亚砷酸联合应用具有协同抗骨髓瘤细胞作用,联合指数均小于1.0.结论:骨髓瘤细胞中XAF1表达缺失与启动子CpG岛过甲基化有关.5-氮杂胞苷在临床上能达到的药物浓度下具有抗骨髓瘤作用,其作用机制是诱导骨髓瘤细胞凋亡,与亚砷酸具有协同抗骨髓瘤作用.
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