【摘 要】
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目的建立人胚胎干细胞体外培养模式,并对其进行冻存及复苏。方法将人胚胎干细胞置于小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养,细胞接近融合状态时进行传代,程序降温法冻存,速溶方法复
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目的建立人胚胎干细胞体外培养模式,并对其进行冻存及复苏。方法将人胚胎干细胞置于小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养,细胞接近融合状态时进行传代,程序降温法冻存,速溶方法复苏,确定解冻后细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并对其生物学特性进行鉴定。结果人胚胎干细胞稳定增殖了5个月,传至20代;细胞在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上呈集落生长,核大,核仁明显。程序降温法冻存后复苏,细胞复苏率达到78.3%;解冻后第12代细胞仍具有稳定的46,XX核型;TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为89.38%。结论成功建立了人胚胎干细胞体外培养模式,为研究人胚胎干细胞及相关疾病的防治提供细胞模型和细胞来源。
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