【摘 要】
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为建立一种能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BVDV的5\'-UTR序列、BRV的VP6基因和IBRV的gB基因设计3对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了一种多重PCR检测方法.特异性试验结果表明,该方法对牛冠状病毒(BCoV)、牛细小病毒(BPV)、牛隐孢子虫没有交叉反应,特异性较好;灵敏性试验结果显示,该方法对BVDV、BRV和IBRV的最低检出限分别为1.44×105,1.38
【机 构】
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河北农业大学动物医学院,河北保定071001;河北省畜牧良种工作站,河北石家庄050061;河北省唐山市动物疫病防控中心,河北唐山064001
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为建立一种能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BVDV的5\'-UTR序列、BRV的VP6基因和IBRV的gB基因设计3对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了一种多重PCR检测方法.特异性试验结果表明,该方法对牛冠状病毒(BCoV)、牛细小病毒(BPV)、牛隐孢子虫没有交叉反应,特异性较好;灵敏性试验结果显示,该方法对BVDV、BRV和IBRV的最低检出限分别为1.44×105,1.38×105,1.2×105 copies/μL.利用该方法对从河北省部分地区采集的50份犊牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示,BVDV和BRV混合感染检出率为18％(9/50),BVDV和IBRV混合感染检测率为14％(7/50),BRV和IBRV混合感染检测率为22％(11/50),3种病毒混合感染率为4％(2/50).多重PCR检测和单一 PCR检测方法均能检出被检样品中的病原,两种方法的总符合率分别为BVDV 90％、BRV 84％和IBRV 88％.该方法比单一 PCR检测方法检测阳性率高,优于单一 PCR检测方法,表明该方法可应用于临床检测.本研究建立的多重PCR检测方法,能快速、有效、准确地检测出BVDV、BRV和IBRV 3种病毒,对于流行病学调查及疾病的诊断等具有重要意义.
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